Examen Doctoral
IH - … Examen de grado de Fernando Castro Chávez, Maestro en Ciencias… Título de Doctor en Ciencias con el trabajo “Análisis de la Expresión de Genes Implicados en el Metabolismo de Lípidos en el Ratón Knock-Out Para Perilipina Resistente a Obesidad”. Adelante, Fernando.
FC – Este trabajo consiste en analizar la expresión de genes de lípidos del ratón que es resistente a obesidad debido a que se le inactivó deliberadamente el gen de perilipina. Como introducción … los métodos actuales consisten básicamente en ejercicio y una dieta adecuada, pero lo que se pretende con este trabajo es básicamente descubrir que es lo que sucede con unos ratones que nunca pueden engordar. Aquí a la izquierda tenemos al ratón obeso, que además es estéril debido a que tiene una deleción en el receptor de leptina y como ven, ni siquiera necesita una persona sujetarlo porque no se puede mover. A la derecha tenemos el ratón no obeso que además es fértil, el ratón perilipina knock-out que es el tema de este trabajo y cuando se cruza una hembra de este animalito gordito, cuyos machos son estériles, con un macho perilipina knock-out, de este producto los machos son fértiles y son delgados. Por eso es que se dice que este animal knock-out cuando se cruza con animales que genéticamente son obesos, sus crías se han “curado” de la obesidad y son sanas, normales y delgadas.
Los antecedentes son los siguientes: Sabemos que la obesidad es un factor de riesgo cardiovascular y para la diabetes. El 34 % de la población adulta, por ejemplo en Estados Unidos, está con sobrepeso.
La inactivación de este gen de la perilipina, que es la proteína que produce la caja que rodea a los lípidos, esta es la proteína de la superficie de la gota lipídica. Cuando se inactivó, produjo ratones delgados resistentes a la obesidad, como ya vimos en la foto.
Los ratones knock-out mostraron una lipólisis constitutiva, debido a que perilipina está constantemente fosforilada, lo que la inactiva. Sus índices metabólicos se incrementaron debido a su consumo de oxígeno. Estos ratones se usaron en este trabajo para clarificar los mecanismos mediante los cuales resisten a obesidad.
Primero vamos a ver el gen de la perilipina humana, está localizado en el cromosoma quince, en esta región. Éste es el tamaño del gen completo, incluyendo sus intrones, se orienta en cadena negativa, quiere decir que a la hora de replicarlo es mediante el método de Okazaki, y tiene cuatro posibles productos de splicing alternativo, que es el mismo gen que produce cuatro diferentes variantes proteínicas en humanos... Las homologías son solamente en sus exones, en estos porcentajes, la misma proteína en otros animales. Es interesante que la homología de la perilipina humana con el ratón es incluso más alta que con el perro o que con la rata, esto habla de homologías no lineales… y desde luego, si incluyéramos a los intrones en estas homologías, esta diferencia se incrementaría…
Y para saber que es lo que activa a la perilipina, los últimos estudios que se han hecho es que el promotor que tiene este sitio, un nuevo sitio, un sitio original, que es el sitio de unión de los PPAR, en este caso, del PPAR gamma. Es un factor transcripcional que cuando el se une a este sitio, en el DNA, se activa la expresión de la perilipina, y lo que se piensa ahora es cuando este otro PPAR, el PPAR-delta, cuando se une a este mismo sitio en el DNA, lo que sucede es la inactivación.
Ahora pasamos a lo que es la representación de la proteína, que a diferencia de los otros miembros de la familia de las adipofilinas, es el que tiene la cerradura adecuada que le permite el ser como el guardián de entrada y de salida de las enzimas que degradan lípidos en la gota lipídica, debido a que es la única de esta familia que contiene sitios específicos de fosforiliación. Sabemos que cuando está el fósforo sobre la peripilina, lo que sucede es que esa perilipina se abre y deja entrar a las proteínas que degradan lípidos, a diferencia de las otras que carecen de estos sitios de fosforilación. Lo que quiere decir es que mientras éstas podrían considerarse proteínas de llenado, la única que lleva el cerrojo, la que controla a la puerta, es perilipina.
Aquí tenemos representado que ante un estímulo de catecolaminas, por ejemplo norepinefrina o epinefrina, que antes era llamada adrenalina, se pega a su receptor, y esto activa a la proteína G, y una vez que la proteína G se activa, activa al AMP cíclico y lo inserta en la proteína cinasa A. Cuando esta proteína cinasa A tiene fósforo, lo que hace es insertar este fósforo tanto en la degradadora de lípidos que es la HSL, como en la puerta de entrada a los lípidos, que es la perilipina. Quiere decir que el fósforo sobre la enzima degradadora, la hace activa para que pueda degradar lípidos, y el mismo fósforo sobre la enzima que protege a la gota lipídica, la hace que se abra para que pueda entrar la degradadora.
Aquí lo que tenemos es de los primeros resultados con microarrays, en los que se estudió a animales obesos. Microarrays, en donde ordenan en un portaobjetos miles de genes, alineados. Es el ratón doble ob, este ratón ob ob es el que tiene deletado el gen de la leptina. Lo que esperaban los investigadores es que los genes de síntesis de ácidos grasos iban a estar incrementados en estos animales obesos. Pero se sorprendieron cuando hicieron el estudio de microarrays, cuando descubrieron que precisamente todos esos genes que se incrementan en la adipogénesis, que es el inicio del tejido adiposo, en vez de aumentar, que es lo que sucede en la adipogénesis normal. Pero estos animales obesos, todos los genes para la síntesis de ácidos grasos están reducidos en su expresión. Eso fue impresionante para ellos y es impresionante para nosotros porque el extremo opuesto, que es el ratón para perilipina knock-out, tiene estas mismas características, los genes de síntesis de ácidos grasos están reducidos. Quiere decir que el ratón obeso es obeso aunque coma lo que uno normal, todo lo que come es lo que almacena y no necesita producir sus propios ácidos grasos. Otra característica de estos animales, es que el inhibidor del activador del plasminógeno 1 estuvo altamente expresado tanto en los ratones obesos como en ratones diabéticos.
¿Cómo se obtuvo ese ratón de perilipina knock-out en el Colegio Baylor, en Houston? Por medio de la inserción de un casete que interrumpió parte del exón y parte del siguiente intrón. Los exones son los sitios que se traducen a proteínas, mientras que los intrones, que están intercalados, no se traducen. En este caso, al introducir este casete, el gen se alteró totalmente, y como Javier lo pudo detectar, por medio de Southern Blot cuando usó esta enzima de restricción, XbaI, se dio cuenta que en ratones normales había un patrón específico de esta longitud, mientras que los animales que tenían la inserción, que era seguro que estaban alterados, tuvieron un patrón más pequeño.
Aquí está la figura que clarifica como los heterocigotos presentan ambas bandas, mientras que los que nosotros estamos estudiando son los homocigotos que producen la banda más ligera, más pequeña.
Aquí tenemos de nuevo los ratones, este es el ratón que se está estudiando, que nunca engorda, no importa cuanta grasa o cuantos lípidos consuma. Aquí está, a su lado, el ratón normal, a la derecha, el ratón obeso estéril, y al final, éste el producto delgado de una obesa con un perilipina knock-out.
Otro equipo de trabajo obtuvo otro ratón perilipina knock-out, pero esta vez ellos insertaron el casete en una porción diferente que el anterior. Este nuevo animal tiene una deleción que se lleva tres exones completos, dos intrones completos, y casi todos los intrones que están más externos.
Vamos a ver las características que están similares en estos dos ratones y las que son diferentes. Las razones por las que son diferentes, yo me imagino que se debe al diferente lugar en el que el casete se insertó. Los autores decían que era debido a que era una diferente cepa de ratón la que usaron, pero pudiera hacer más sentido que hubiera algunos reguladores, o incrementadotes (enhancers) o reductores en los diferentes sitios que se han removido. Básicamente la diferencia es que el ratón que se obtuvo en el Colegio Baylor no desarrolla una diabetes extrema, sino una ligera resistencia a insulina pero se balancea de tal forma que tiene los niveles de glucosa normal en la sangre. Me parece que es porque la deleción del exón es más pequeña y de una parte del intrón. Y este otro sin embargo desarrolla diabetes, yo me imagino que es debido a que en este se detruye más, tres exones e intrones…
Aquí, una de las características del ratón resistente a obesidad es que si se le pone a cuatro grados centígrados, sin comida, su temperatura empieza a bajar más rápido que el animal normal en las mismas condiciones, sin comida …Aquí tiene más posibilidades de morir el knock-out. Pero si se le pone alimento a esa misma temperatura, el knock-out mantiene su temperatura.
En el último trabajo que ví del Laboratorio del Doctor Chan …curiosamente con comida, el perilipina knock-out incluso mantiene una temperatura corporal mayor que la del animal normal, y esto fue significativo. O sea que si come y come no hay problema de frío o de morir por congelamiento a bajas temperaturas…
La justificación es que este ratón resistente a obesidad es como un modelo para aprender metabolismo, y al aprender este metabolismo, podemos sacar posibles tratamientos contra la obesidad … si personas obesas tienen problemas en diferentes tejidos de su organismo, lo que suponemos es que también este modelo de antiobesidad va a reflejar variaciones en los diferentes tejidos del organismo… podemos explorar tratamientos de las rutas metabólicas que están alteradas en este animal, especialmente las que están relacionadas con perilipina. Estos genes alterados que se encuentran al inicio de las rutas metabólicas pudieran ser usados como sitios clave para desarrollar tratamientos contra obesidad y también para combatir complicaciones colaterales como diabetes.
La hipótesis es que “los genes ubicados en el metabolismo de lípidos mediante beta oxidación están sobre expresados en este animal”. Por lo tanto, el objetivo general, en coordinada relación con la hipótesis es “determinar la expresión de genes implicados en el metabolismo de lípidos en el ratón knock-out para perilipina resistente a obesidad en los siguientes tejidos: el adiposo blanco, músculo, corazón, hígado y riñón”.
Los objetivos particulares derivados de este objetivo general son: ¿que tanto aumenta la expresión de los genes para la beta-oxidación?”, que coincide con la hipótesis, y “determinar el nivel cambio de otros genes que pudieran estar relacionados”, y validar esos resultados mediante otro método diferente al método principal que es el uso de microarrays, como veremos en la metodología.
Aquí en la metodología se toma el animal normal y el animal que nunca engorda y se les extraen estos tejidos, y de cada uno de estos tejidos se extrae el RNA total, del que se extrae solamente el RNA mensajero, el que se va a convertir en proteínas. Y de este RNA mensajero se obtiene la primera hebra del DNA complementario, de la que se obtiene la segunda hebra, para hacer una transcripción in vitro en la que se van a insertar los marcadores de biotina, que van a ser los colores que se van a ver al final en el microarray. Entonces se fragmentan estos RNA complementarios, y ya que están fragmentados se aplican al microarray, a esa gran cantidad de genes alineados en el portaobjetos. Y de aquí, lo que queda es el análisis, la lectura y la validación de resultados.
El análisis en sí, que como se ve en la computadora es de esta forma, y allí cada uno de los genes tiene veinte diferentes sondas, y aparte de esas veinte, otras veinte que tienen modificado el nucleótido de en medio. O sea que, cada gen tiene cuarenta sondas. Veinte que son los alineamientos perfectos y veinte que son alineamientos imperfectos. Y están distribuidas uniformemente, y el software adecuado puede reconocer en donde están cada una de esas cuarenta y las junta para ver como hibridizó. Y esto es lo que se vé, esta es la curva de la expresión de los veinte fragmentos de un gen en particular con el alineamiento perfecto, y la curva con el alineamiento imperfecto está aquí más abajo. Este por ejemplo fue el animal knock-out y este es el animal normal. Lo que hace el programa es calcular el área dentro de esta curva entre las dos alineaciones del animal normal y dividirla entre el área dentro de esta curva que fue la del animal knock-out. Finalmente, hecho este cálculo, se ve que tanta diferencia en el área bajo la curva se incrementó, como en este caso, ya nos dice si es en dos veces, o si fue de un 50 % y el programa lo pondría como 1.5 veces incrementado. En este otro caso lo que estamos viendo aquí es reducción, y como algunos genes podrían tener cierto ensamblaje imperfecto, se podría eliminar esta curva, y el programa lo hace, del ensamblaje imperfecto y nomás se calcula la diferencia de la curva grande, el ensamblaje perfecto del animal knock-out comparado con del tipo silvestre.
Entonces, con eso, lo que se obtuvo es, lo primero, que en los genes del tejido adiposo blanco es más la reducción en la expresión que el incremento en la expresión. El resto de los tejidos tuvo un aproximadamente balanceado incremento y reducción. Pero en el que se ve un des-balance muy grande es en el tejido adiposo, en lo que es las grasas de este animal resistente a obesidad y que es más la reducción que el incremento en la expresión genes.
El 33 % de esos genes que se redujeron en el tejido adiposo está relacionado con genes de transcripción y traducción. Aquí hay una gran cantidad de genes. Y el gen de CEBP-alpha, que estudiamos por recomendación de la Doctora Cristina, aparece dentro de estos genes que se redujeron. Por lo tanto, ya podemos descartar ahora concretamente y decir que la regulación negativa de estos genes del metabolismo de lípidos no corresponde a las CEBP sino más bien está por el lado de las PPAR, los derivados de la PPAR-alpha reprimiendo al resto del sistema metabólico de síntesis de lípidos. Ya vimos que perilipina es reprimida por PPAR-delta y activada por PPAR-gama.
… Mientras más azul es la expresión, eso significa que la expresión está más baja y mientras más roja es la expresión, eso significa que el gen está más alto en su expresión. El animal knock-out incrementó grandemente la expresión de sus genes metabólicos comparado con el tipo silvestre, en cambio el animal knock-out redujo dramáticamente su expresión de los genes de síntesis de ácidos grasos …el resultado más impactante de este trabajo es que está muy clara la diferencia entre el tipo silvestre y el tipo que no engorda, y que activó su metabolismo para la degradación de lípidos, y a la vez redujo la expresión de los genes de traducción y transcripción.
Los notables genes en la categoría de expresión reducida son el SCD1 y el SCD2 que cayó dentro de genes de transcripción y el SCD2 en el animal tipo silvestre se expresa mas altamente en el tejido adiposo blanco comparado con cualquier otro tejido que pudiera indicar la importancia del gen.
La expresión de estos genes se evaluó usando otra metodología aparte de los microarrays, RT-PCR (reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real) la que descubrió la misma relación diferencial. Viendo que los genes que se redujeron en los microarrays también se redujeron aquí, y viceversa.
Entonces, la discusión es primero poner juntos todos esos colores azules y rojos para que tengan cierto sentido. Que tengan sentido en el metabolismo, y al ponerlos en orden …claramente se ve que los porteros de la entrada de la acil coenzima A, que es producto de degradación de lípidos, se encuentran altos en su expresión, la carnitina acilcarnitina translocasa y la carnitina O-palmitoil transferasa 2. Estos dos estaban incrementados, quiere decir que los organelos del tejido adiposo blanco, que sabemos que son principalmente mitocondrias, podrían estar participando peroxisomas, pero ese estudio queda pendiente, no se vio en detalle que porcentaje podrían estar influyendo.
Entra la acil coenzima A, y es beta oxidada con estas enzimas que están incrementadas, para obtener acetil coenzima A, que a su vez sigue su proceso en el ciclo de Krebs para terminar en la cadena de transporte electrónico.
Se estaba observando la hipótesis de que solamente los de la beta oxidación estuvieron incrementados, pero se vio que tanto los porteros de entrada de acil coenzima A, como el ciclo de Krebs y la cadena respiratoria también estaban incrementados, coordinadamente trabajando desde el principio, mientras que todo lo que es la internalización de acetil coenzima A que pudiera provenir de carbohidratos, al menos en el tejido adiposo, está juntamente reducido. Es decir, que en el tejido adiposo blanco, las mitocondrias y algún otro organelo como peroxisomas están virtualmente concentrados en quemar grasas.
Mientras que, como en el caso de los antecedentes que
vimos que los ratones obesos tenían baja expresión de genes de síntesis de
ácidos grasos, curiosamente vimos algo similar en el animal resistente a
obesidad. La disminución en la expresión de genes involucrados en la síntesis
de ácidos grasos insaturados como son las SCDs que se vieron en la gráfica, con
los colores azules, y también los genes de la síntesis de colesterol, están
bajos en su expresión en este animal.
Dos de los genes que aquí se presentan han sido recientemente usados como sitios blanco para contrarrestar colesterol. Entonces de lo que suponíamos que algunas de estas rutas reducidas que se podrían estudiar para controlar obesidad o reducir colesterol, eso, algunos investigadores ya están empezando a usar genes que están en estas rutas para reducir colesterol.
… Las enzimas relacionadas con la insaturación, las que in-saturan los ácidos grasos dentro de nuestro organismo, bajaron en su expresión, y de nuevo aparecen relacionadas con factores transcripcionales y de traducción. SCD1 aparece junto con el factor de iniciación de traducción, en todos los tejidos. Quiere decir que SCD1 está relacionada de alguna manera con procesos de trancripción.
Cuando se alinean estas enzimas de instauración en el tejido adiposo solamente, vemos que ambas quedan juntas (SCD1 y SCD2) y agrupan con la ATP citrato liasa, que es la que hace la síntesis de ácidos grasos en el citoplasma, está reducida al mismo nivel que las anteriores.
Cuando vemos la comparación entre tejidos, se ve que el corazón y el riñón tienden a seguir una ruta semejante de incremento, tanto en el ciclo de Krebs como en la degradación de ácidos grasos por la beta oxidación semejante al tejido adiposo blanco.
Cabe aclarar que los animales que se eligieron para este trabajo son animales de entre seis y diez semanas de edad, que no han sido sometidos a ningún tipo de carga dietética, no se les ha puesto nada de dieta alta en grasas o carbohidratos, por lo tanto, a nivel basal, éstos dos tejidos, corazón y riñón, están colaborando en la degradación. Ya en animales adultos, en otros experimentos, se ve que el músculo se incorpora a hacer lo mismo… Quiere decir que una vez que los alimentos son digeridos, el estómago da una señal … se comunica con el cerebro, y para corto plazo la energía se almacena en el hígado, y para largo plazo, que es en forma de grasas, la energía se almacena en el tejido adiposo. Y cuando es necesario, para hacer ejercicio y actividad, los tejidos todos ellos se comunican, cerebro, hígado y tejido adiposo, para mandarle al músculo el tipo de energía, ya sea a corto plazo o a largo plazo que sea necesaria. Entonces, este trabajo es muy bonito que habla acerca de una intensa comunicación entre tejidos, y todos los cambios que nosotros vimos … se alteraba en uno, se alteraba también en el otro…
Esto ya es algo extra, no estaba como parte de la hipótesis u objetivos, pero es un punto importante que en el mismo tejido adiposo aparecieron genes con macrófagos, con leucocitos, y a su vez genes relacionados con globinas… Platicando con el Presidente del Jurado, Doctor Iván, me comenta que éstas dos primeras (Cyba, Fmo5) podrían estar involucradas en el incremento de los citocromos para la cadena respiratoria. Entonces aquí se ve que también hay cierta coordinación en la expresión de éstos genes.
Y el último aspecto de este trabajo que tampoco estaba planeado pero que apareció es el ligador palindrómico que está dentro de miles de transcritos presentes en genbank y en los kits de Affymetrix. Es una secuencia palindrómica que puede unir fragmentos de genes presentes en dos diferentes cromosomas, pero al estudiar con más detalle se ve que el palindroma se autohibridiza y al hacer esa autohibridización, evade el ataque de la enzima de restricción que iba a digerirlo, entonces permanece indigerido por estar autohibridado y la enzima no lo puede capturar, y hay miles, hasta ahora, en el último estudio encontré más de diez mil de este tipo de transcritos en el genbank, y de ellos, al menos un 10 % están dentro de Affymetrix. Lo que significa es que si las personas no están concientes que hay un falso positivo de la transcripción que es un artefacto, y lo toma como real y como parte de algo que sucede en la naturaleza, y lo usan como sitios blanco para antibióticos o tratamientos farmacéuticos, obviamente esto va a dar un falso resultado…
Así de que, con todo lo que se ha dicho. Las conclusiones son que en este trabajo vimos que las rutas que se incrementaban son las catabólicas oxidativas de ácidos grasos: beta-oxidación, ciclo de Krebs y cadena de transporte electrónico, y se redujeron las rutas de expresión de genes para síntesis de lípidos y de colesterol. Vimos que los transcritos de las proteínas involucradas en procesos de transcripción y traducción forman el 33% de los genes que se redujeron en tejido adiposo blanco y vimos que también pudiera ser que pudiera deberse a factores transcripcionales o co-activadores que están actuando como mediadores los que causan todos estos cambios en la expresión …ya que andan nadando libres en las células del tejido adiposo y algunos otros que se pudieran excretar para la comunicación estrecha entre tejidos para explicar los cambios que existen en otros tejidos. Los resultados nos pueden ayudar a descubrir un tratamiento para el control de la obesidad, siguiendo las rutas de los genes que se redujeron en su expresión y tratando de estudiar más detalladamente esos genes, si se reducen estos, o incluso perilipina, de una manera reversible, se podría controlar la obesidad de una manera farmacológica temporal. Y el desubrimiento de ese ligador palindrómico que no estaba planeado, pero que se encontró y también del RNA mensajero para globinas y transcritos relacionados con macrófagos que se encontró en el tejido adiposo de estos animales alterados
Las limitaciones es que solamente se usaron machos y no se analizó el tejido
adiposo marrón del ratón.
Perspectivas es también se podría hacer estudios antiateroscleróticos con estos ratones y estudiar también la expresión de genes de los animales que recuperaron la fertilidad ya que sería muy interesante saber que cambios hubo en esos tejidos. Así mismo el estudiar genes que son específicos de organismos como un gen que solamente, cuando se hizo la comparación en el genbank, solamente dio la expresión en ratón, no tiene homólogos en otro organismo (AA185432), eso sería muy interesante y así como pudiera haber esos genes, que son específicos de especies, porque ya se sabe que hay genes específicos de tejidos, si se hace un tratamiento para esos genes que son específicos de tejidos, en el trabajo se presentan diez ejemplos para tejido adiposo, eso podría controlar específicamente a un tejido…
Agradezco a mi familia, especialmente a mi esposa, por sus esfuerzos y constante amor y apoyo.
Aquí están todos los que colaboraron en este trabajo, tanto de la Universidad de Tejas como del Colegio Baylor.
Los productos de este trabajo, que se anexan al final de la tesis son el artículo en la revista de Diabetes, el artículo de revisión en Annals of Hepatology, el capítulo en un libro especializado de obesidad sobre los genes implicados en la susceptibilidad a obesidad y genes antiobesidad.
Estas son referencias de algunos autores que citan a este trabajo, este es interesante porque cita este trabajo en un estudio con seres humanos y tratan de aplicar los resultados de lo que nosotros presentamos como que también pudiera estar sucediendo en seres humanos. Este es otro trabajo del Baylor donde usaron similar técnica de validación, específicamente el RT-PCR. Esta cita nuestra referencia en el caso del posible surgimiento de nuevas drogas …y este investigador puso nuestra referencia en su tesis de trabajo, en su tesis doctoral, que el está viendo cambios en las células aisladas de adipocitos. Este es otro trabajo de España en el que se revisa la técnica de microarrays para el estudio de nutrigenómica y nutrigenética. Este no se que diga, está en Noruego…
(Los jurados sonríen)
Estos son los correos electrónicos que he recibido, reduje la cantidad. El primero es interesante porque el 20 % de los artículos que cito en el artículo de Diabetes incluyen a quien me escribe como su coautor y dice que “le parece interesante y provocativo el hecho de haber encontrado estos genes relacionados con macrófagos en el tejido adiposo blanco”. Este también es muy importante porque es el que hizo el ratón knock-out para SCD1, la enzima que insatura ácidos grasos, que es muy parecido a este ratón que estudiamos, excepto que su ratón produce necrosis en el hígado y aún no saben porqué. Este es interesante porque están estudiando la relación entre tejido adiposo y macrófagos. Este otro descubrió una proteína que se estimula en ayuno que en nuestro caso estuvo incrementada en su expresión. Aquí, esta persona del Instituto Pasteur está también estudiando la comparación entre macrófagos y adipocitos. Como ven eso está muy en boga ya que cuando el macrófago queda atrapado en las arterias comienza a expresar características de adipocitos y cuando adipocitos están alterados en ratones que no pueden almacenar grasa, comienzan a expresar genes que pudieran ser tipo macrófagos. Este se interesó, incluso dijo que quería colaborar, ya hasta alguien me escribió de una revista que pudiera ser el referee de un trabajo.
Y, este es el último, éste es un amigo de Houston que traté de explicarle y me dice, “oye eso es bastante difícil de entender, bastante extraño”, pero mejor combatimos la obesidad en las calles, y su estrategia ha sido básicamente, mientras llega el descubrimiento de ese producto farmacéutico que fuera reversible para inhibir perilipina, ha sido la de hacer ejercicio y nutrición, eso es todo.
(La audiencia sonríe)
IH – Yo creo que queda a consideración de los sinodales el trabajo, ¿preguntas?
CI – Felicidades, Fernando … trabajo que además tiene muchas posibilidades futuras… Yo tengo una duda en relación con los obesos estériles que se cruzan con los perilipina knock-out…
FC – Tanto los homocigotos que carecen de leptina (ob ob) como los que carecen del receptor de leptina (db db), al cruzarse con el perilipina knock-out recuperan la fertilidad. Evidentemente han de ser hembras de esas líneas las que se crucen con los machos perilipina knock-out ya que machos de esas líneas son regularmente estériles… Se sabe que perilipina se expresa en células esteroidogénicas pudiera ser que esa alteración en el caso del perilipina que no se expresa, pudiera compensar la otra inactivación pero eso está en estudio y es una de las perspectivas más interesantes, el ver que es lo que está cambiando en estos animales… Por otro lado, los genes reducidos en su expresión relacionados con la transcripción y traducción fueron unos 130 genes que permanecen abiertos cual importantes prospectos para la investigación futura.
SU – Felicidades … respecto a los detalles sobre las diferencias entre los dos modelos knock-out para perilipina…
FC - … comen, a temperatura ambiente, 30 % más que el animal normal para conservar su temperatura corporal estable, en cambio, el animal del otro grupo de trabajo come normalmente o sea, que no incrementa el consumo alimenticio. Esa para mi es una de las diferencias más dramáticas. ¿Ambos animales son resistentes a la obesidad?, sí. ¿Ambos animales son fértiles?, sí. ¿El tamaño es normal? Así es. El consumo de oxígeno en ambos modelos animales está aumentado. Los músculos en ambos animales están incrementados, son más musculares sin necesidad de hacer ejercicio; ¿Porqué? Porque necesitan quemar energía… Especialmente en el adulto. El tejido adiposo blanco es más magro, con una reducción más uniforme en el modelo de Tansey que en el de Javier pero al fin de cuentas, el tejido adiposo blanco tiene el mismo número de adipocitos que un animal normal, nomás más pequeños en tamaño porque no almacenan la gota lipídica. La leptina plasmática presentó diferencias, en el animal de Javier está reducida, ¿qué es lo que hace la leptina? Es la que le da la señal en el cerebro de que ya está lleno, de que ya no ha de seguir comiendo más. Entonces, si está reducida en el animal de Javier, que nunca engorda, eso significa que nunca se le va a dar la señal de que está saciado, de que ya estuvo bien de comer … y aquí es donde empiezan las diferencias principales con el otro modelo, en donde la leptina está aumentada. Es decir que aquí la leptina constantemente le está dando señales a este animal de que “ya estás lleno”, “ya estás lleno”, ya no necesitas seguir comiendo, es decir que el animal que nosotros investigamos no tiene el límite y él se la puede pasar comiendo. Entonces, en cuanto al consumo de alimentos, en respuesta a tu pregunta de que la leptina está incrementada en el otro modelo, allí el consumo de alimentos es normal. Quiere decir que cada que la señal está aumentada, el animal deja de comer. En el animal que nosotros estudiamos, la leptina está reducida, el animal no tiene un punto de alto y sigue comiendo, teniendo un consumo de alimentos un 30 % mayor que el animal normal. En el caso del metabolismo de la glucosa, en nuestro modelo es normal, pero en el otro modelo está dañado, quizás la constante derrama de leptina, que también es secretada por el tejido adiposo, tenga algo que ver, que aún no se ha estudiado, para que esto se pueda dar, en el caso del daño en el metabolismo de glucosa en el otro modelo. Los animales de nuestro modelo, en un reciente artículo se reportó que al año de edad desarrollan una ligera resistencia a insulina, pero siguen siendo normales porque tienen la cantidad normal de glucosa en la sangre. Entonces, se puede decir que el modelo que usamos no tiene peligro de desarrollar una diabetes patológica como el otro, el cual desde pequeño ya tiene el metabolismo de glucosa dañado. La otra cosa que esta diferente es la glucosa e insulina plasmática que está elevada en el otro modelo, quiere decir que en ese, tanto insulina como leptina en la sangre están elevadas, mientras que en el caso que nosotros trabajamos, la glucosa e insulina es normal tanto en el animal chico como en el animal de un año… (Aquí el video se detuvo).
(CG le da lectura al acta de Examen Recepcional)
Dicha acta que CG leyó y que IH concluyó, declara en sus últimos párrafos:
“… se procedió a escuchar la disertación del alumno sobre su trabajo recepcional, al concluir esta, se procedió a interrogar al alumno y cuestionar su trabajo, a efecto de que se manifieste su dominio del tema y para que defendiera su postura sobre los distintos puntos de su trabajo recepcional.
Una vez concluido, los integrantes del jurado procedieron, en privado, a deliberar sobre el resultado del examen, quienes determinaron que el alumno fue APROBADO.
Acto continuo, el Presidente del Jurado procedió a tomar al alumno la protesta correspondiente en los siguientes términos:
¿Protesta usted ejercer la profesión con honradez, consagrar su ejercicio al bien de la colectividad, velando siempre por el nombre de la Universidad de Guadalajara?
A lo que el alumno contestó:
“SI PROTESTO”
El presidente del Jurado añadió:
“Si así lo hiciere, su conciencia y la colectividad se lo premien y si no, se lo demanden”.
Esta sesión se dio por terminada, siendo las 13:00 trece horas, firmando para su constancia quienes en ella intervinieron.” (Aparecen 9 firmas, de un servidor, de mis seis sinodales, de la destacada coordinadora del programa y del secretario académico).
Productos de este trabajo son:
El artículo
en Diabetes: http://diabetes.diabetesjournals.org/cgi/content/abstract/52/11/2666
La
revisión en Annals of Hepatology: http://www.medigraphic.com/pdfs/hepato/ah-2004/ah044c.pdf
El capítulo
del libro especializado de Obesidad: http://www.oocities.org/plin9k/fdocc-genes-obesidad.pdf
El libro
de Tesis: http://www.oocities.org/plin9k/tesis-fdocc.zip
Mis tres publicaciones para la “Sociedad Internacional de Complejidad Información y Diseño”:
http://www.iscid.org/papers/Chavez_Palindromati_101505.pdf
http://www.iscid.org/papers/Chavez_MolecularAnalysis_030804.pdf
http://www.iscid.org/boards/ubb-get_topic-f-6-t-000553.html
Tasters of the Word (YouTube), videos recientes: "Astronomía y Nacimiento de Jesucristo: Once de Septiembre Año Tres A.C.", "Estudio sobre Sanidades" (en 20 episodios), "Jesus Christ, Son or God?" and "We've the Power to Heal":
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